Bienvenidos a este Blog de Microbiología. Este es un espacio dedicado a estudiantes de Microbiología y al publico en general que deseen aprender acerca de este maravilloso tema, en donde podrán aprender algunas técnicas y contenidos que les será muy útil.
Técnicas y Métodos de estriado en caja y tubo
(medios de cultivo)
a)
Estriado básico: Se calienta el asa de inoculación hasta que quede color rojo
intenso para eliminar cualquier microorganismo, dejar que el asa se enfrié
durante 3-5 segundos. Recoger una muestra del cultivo bacteriano a partir de un
caldo o una placa Petri. Levantar la tapa de la placa Petri que se va a sembrar
en un ángulo de 45°, colocar el asa en la parte de atrás de la caja, tocar con
el asa el medio y pasarlo a través de la superficie de la placa con un
movimiento en forma de S desde atrás hacia adelante.
b) Estriado para aislar: implica una sola
inoculación de una sección de la placa Petri y a continuación disminuir la
colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos a tres
secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos.
c) Estriado por cuadrantes: se divide la parte
inferior de la caja Petri en cuatro partes iguales con un marcador. Se
esteriliza el asa y se estría el 1er cuadrante con el procedimiento básico de
S. Se trabaja en el sentido de las agujas del reloj, estriando cuadrante por
cuadrante, esterilizando el asa antes de seguir a otro.
d) En tubo: esterilizar el asa como ya se
mencionó anteriormente. Tomar la porción de muestra con el asa. Con la mano
opuesta a la que sujeta el asa tomar el tubo por la parte inferior. Con el dedo
meñique de la mano con la que sostiene el asa, retirar el tapón de algodón o la
tapa de rosca del tubo, y reténgala, no la coloque en la mesa de trabajo.
Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por
la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración los
microorganismos contaminantes que se encuentren en esa zona. Introducir el asa
con la muestra en el tubo. A partir de aquí la siembra se puede realizar de
distintas maneras:
·Deslizando
el asa desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña trazando
una línea longitudinal.
·Deslizando
el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, imprimiéndole
un movimiento de zigzag.
·Moteando
toda la superficie de la cuña con un hisopo.
Al concluir la siembra se flamea y se taponea
nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en el mechero.
Técnicas estériles
Las placas de Petri son un ambiente rico en
nutrientes, por lo que es importante la utilización de técnicas estériles en
todo momento. Nunca dejes a una placa de Petri abierta. Siempre expón a tu asa
de inoculación a las llamas antes y después de transferir las bacterias de un
medio a otro. Algunos laboratorios pueden requerir el uso de una máscara o
trabajar dentro de una campana de tiro descendente para reducir al mínimo los
contaminantes ambientales.
Técnica de estriado básico
Calienta el asa de inoculación hasta que quede
de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa
se enfríe durante 20 o 30 segundos, pero no lo soples para no reintroducir
microorganismos. Recoge una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo
o una placa de Petri. No necesitas de una presencia bacteriana visible. Levanta
la tapa de la placa de Petri que vas a sembrar en un ángulo de 45 grados,
coloca el asa en la parte de atrás del plato, toca con el asa en el medio y
pásalo a través de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S
desde atrás hacia adelante. Algunos laboratorios pueden querer que gires la
placa a 90 grados y repitas el procedimiento de inoculación para una cobertura
completa.
Estriar para aislar
Estriar para aislar implica una sola
inoculación de una sección de la placa de Petri y a continuación, disminuir la
colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos o tres
secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos.
Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bacteriólogos
también utilizan este método para aislar una línea de bacterias que nacen de un
solo progenitor.
Estriado en T
Para llevar a cabo con precisión un estriado en
T, dibuja una "T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea
la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador permanente, divídela por la
mitad. A continuación, dibuja una línea divisoria en una de las mitades para
dividirla hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la
sección más grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el
procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio con el barrido en
forma de S, pero no cruces la línea media. Vuelve a calentar el asa para matar
cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de
las secciones más pequeñas quede en la esquina inferior derecha. Comienza
barriendo en forma de S en la esquina derecha de la primera sección que
estriaste, en la nueva sección. Pon el asa al calor de la llama hasta que quede
de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Gira la placa una
vez más y repite el barrido en S de la segunda sección a través de la tercera.
SIEMBRA EN AGAR INCLINADO EN TUBO DE ENSAYE. El agar, una sustancia similar a la gelatina
que se extrae de las algas rojas, es usado comúnmente para
cultivar microorganismos. Se le agregan varios nutrientes para favorecer
el crecimiento bacteriano y se coloca tanto en placas planas como en tubos de
ensayo. Cuando se coloca en un tubo de ensayo, el agar está en forma líquida.
Estos luego son colocados en ángulo para que se enfríen y solidifiquen, creando
una superficie inclinada, o un agar inclinado (agar slant, en inglés).
INCLINACIÓN
Los medios de agar inclinado se
realizan llevando el agar a punto de ebullición y vertiéndolo en un tubo de
ensayo. Antes de que el agar se enfríe y solidifique, el tubo de ensayo se
coloca inclinado sobre un lado. Una vez que el agar se enfría, el tubo
puede volver a colocarse en posición vertical y el agar que se encuentra en su
interior se verá inclinado.
El inóculo se siembra, con ayuda de ansa, de la
siguiente manera:
• En profundidad con ansa de punta: se pica con
el ansa el cultivo a sembrar y se introduce mediante punsión en el medio
contenido en la parte inferior del tubo
• En
superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se
esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.
¿Cuál
es el propósito de estriar una placa de agar?
Los estudios que implican los cultivos
microbianos a menudo requieren la identificación de los organismos presentes en
un cultivo. Cuando una pequeña porción de este cultivo se inserta en un medio
nutriente que contiene agar, es posible mezclar una mezcla de bacterias
individuales en unidades que forman colonias.
Materiales
Estriar una placa de agar requiere placas de
agar nutrientes, un asa para la inoculación, un cultivo de bacterias, una
disolución desinfectante como lysol al 10%y un mechero de bunsen. También
tendrás que vestir ropa de seguridad como una bata de laboratorio, y lentes de
seguridad contra productos químicos. El inoculo para rayar se toma a partir del
cultivo stock bacteriano utilizando el asa y estriando atraves de las placas de
agar nutriente.
Métodos-técnicas
• Estriado básico
Calienta el asa de inoculación *hasta que quede
de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa
se enfrié durante 20 o 30 segundos pero no lo soples para no reintroducir
microorganismos. Recoge una muestra de cultivo bacteriano a partir de un caldo
o de una placa petri, no necesitas una presencia bacteriana visible. Levanta la
placa de petri, que vas a sembrar en un ángulo de 45 grados, coloca el asa en
la parte de atrás del plato, toca con el asa en el medio y pásalo atraves de la
superficie de la placa con un movimiento en forma de ``S`` de atrás hacia
adelante.
• Estriar para aislar
Implica una sola inoculación de una sección de
la placa petri y a continuación, disminuir la colonia arrastrando
microorganismos de la sección inicial de dos otras secciones adicionales,
achicando eficazmente la población de microorganismos generalmente utilizado
para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bactemotogos también
utilizan este método para aislar una línea de bacterias que nacen de un solo
progenitor
• Estriado en ``T``
Para Llevar a cabo con precisión un estriado en
T, dibuja una T en la parte posterior de la placa petri. Voltea la tapa de la
placa hacia abajo, con un marcador permanente, divídela por la mitad. Dibuja
una línea divisora en una de las mitades hasta formar una T. jira la placa de
manera que la sección más grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo
con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula le medio con el
barrido en forma de S pero no crucen la línea media.
• Estriado por cuadrantes
Este es un método de estriado para el
aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de 3. Divide la parte
inferior de la placa Petri en 4 partes iguales con un marcador permanente.
Utiliza los procedimientos básicos de estriado para inocular el primer
cuadrante. Trabajo en el sentido de las agujas del reloj, llevando los
microorganismos de un cuadrante a otro como lo hiciste en el método de
estratificado en T y calentado el asa antes de inocular el siguiente cuadrante.
Calienta el asa y barre en forma de S desde el uno hasta el cuadrante adyacente.
ESTRIADO EN TUBO (INOCULACIÓN EN TUBO)
Por estrías
1)Coger el asa por el cabo,
introducirla directamente en la zona de color azul de la llama del mechero
hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente se produce a introducir
lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto
2)Retire el instrumento de la
llama y espero de 4 a 5 seg. Con el objetivo de que el asa enfrié
3)Con el asa estéril y fría
tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado y trasládelo de
inmediato para el medio de cultivo selectivo.
4)Con la mano puesta a la
que sujeta el asa tome el tubo para la porción inferior. Con el dedo meñique de
la mano que sostiene el asa y retire del tubo del tapón de algodón a la tapa de
rosca y retegola
5)Flamee de inmediato la
boca del tubo de ensayo pasándola y o dos veces por la llama del mechero, con
el objetivo de eliminar incineración, los microorganismo contaminantes que se
encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo
6)Introduzca el asa con el
volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo de la cuña a
partir de este punto la siembra puede realizarse de diferentes maneras.
¨Deslizando el asa, desde
el fondo hacia arriba por toda la superficie de la cuña trazando una línea
longitudinal
¨Deslizando el asa por la
superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, impidiéndole o movimiento de
zigzag
¨Motiando
toda la superficie con un hisopo
¨Efectuado
cualquiera de las 3 bonotes explicadas pero adicionalmente rotándolo en medio
con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal
7)Al concluir las siembra se
flamea la boca y se toponea nuevamente el tubo procesando a esterilizar el asa
en las llamas del mechero
Estriado en tubos de ensayo.
·Siembra
en tubos de cultivo con medio sólido
Las siembras en tubos con medio sólido, por lo
general se emplean para la conservación de un cultivo puro proveniente de una
placa o para la siembra de pruebas bioquímicas como el medio OF, SIM y MIO. El
pico del tubo. Del medio con agar se inocula primero por punción (cuando es
necesario), seguido por una estría en el pico del tubo desde el fondo a la
parte superior con un movimiento en “S” a medida que se retira el asa.
·Siembra
en medios de cultivo líquidos.
La siembra en tubos de cultivo en medio
líquido, el tubo debe inclinarse en un ángulo de 30 ° y el asa de inoculación
debe tocar la superficie interna del vidrio, justo encima del punto donde la
superficie del agar forma un ángulo agudo. Cuando el tubo es vuelto a su
posición vertical, el área de inoculación queda sumergida debajode la
superficie, se puede agitar suavemente el asa en el interior del medio líquido.
Tipos de cultivo en tubos de ensayo:
·Siembra
por estrías en superficie:
Se utilizan los medios de cultivo inclinados,
se toma una muestra de alguna colonia con el asa estéril y sobre la superficie
del medio se desliza ésta en forma de estrías.Se siembra el material en
la superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende
por toda la superficie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y
cargada con el material a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero
tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie
inclinada y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del
tubo.
·Por
picadura o punción:
Se utilizan los medios de cultivo en un tubo
solidificado en forma inclinada y en forma recta, se toma la colonia y se
introduce en el medio picándolo longitudinalmente. Con una aguja se toma el
material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio
semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de punción,
trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar
la movilidad de las bacterias. sufinalidad es estudiar la movilidad de
las bacterias
·Siembra
en TSI:
(Por picadura y estrías en superficie): el TSI
(Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa,
hierro y un indicador que es el rojo fenol.
En este medio se siembra por picadura y
estrías en superficie, para estudiar los cambios que ocurran en la
superficie y profundidad.
·Siembra
por dilución:
Se toma el tubo de ensayo con medio líquido,
como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el
tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriológico, se agita,
con movimientos moderados. Su finalidad es poner la bacteria en suspensión.
¿Cuál es el propósito de estriar una placa de
agar?
Los estudios que implican cultivos microbianos
a menudo requieren la identificación de los organismos presentes en un cultivo.
Cuando una pequeña porción de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que
contiene agar, es posible separar una masa de bacterias individuales en
unidades que forman colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en
colonias discretas que muestran características que ayudan a identificar el
organismo.
Métodos -
Técnicas
1) Estriado básico
Calienta el asa de inoculación hasta que quede
de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa
se enfríe durante 20 o 30 segundos, Recoge una muestra del cultivo bacteriano a
partir de un caldo o una placa de Petri. Levanta la tapa de la placa de Petri
que vas a sembrar en un ángulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrás
del plato, toca con el asa en el medio y pásalo a través de la superficie de la
placa con un movimiento en forma de S desde atrás hacia adelante.
2) Estriar para aislar
Estriar para aislar implica una sola
inoculación de una sección de la placa de Petri y, disminuir la colonia
arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos o tres secciones
adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos.
Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los
bacteriólogos también utilizan este método para aislar una línea de bacterias
que nacen de un solo progenitor.
3) Estriado en T
Dibuja una "T" en la parte posterior
de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador
permanente, divídela por la mitad. A continuación, dibuja una línea divisoria
en una de las mitades para dividirla hasta formar una "T". Gira la
placa de manera que la sección más grande quede a tu derecha. Inocula el asa de
acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio con
el barrido en forma de S, pero no cruces la línea media. Vuelve a calentar el
asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que
la primera de las secciones más pequeñas quede en la esquina inferior derecha.
Comienza barriendo en forma de S en la esquina derecha de la primera sección
que estriaste, en la nueva sección. Pon el asa al calor de la llama hasta que
quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Gira la
placa una vez más y repite el barrido en S de la segunda sección a través de la
tercera.
4) Estriado por cuadrantes
Este es también un método de estriado para el
aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de tres. Divide la parte
inferior de la placa de Petri en cuatro partes iguales con un marcador
permanente. Utiliza los procedimientos básicos de estriado para inocular el
primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj, llevando los
microorganismos de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el método del
estratificado en T y calentando el asa antes de inocular el siguiente
cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el primero hasta el cuadrante
adyacente.
Los estudios que implican cultivos microbianos a menudo
requieren la identificación de los organismos presentes en un cultivo. Cuando
una pequeña porción de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que
contiene agar, es posible separar una masa de bacterias individuales en
unidades que forman colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en
colonias discretas que muestran características que ayudan a identificar el
organismo.
Estriado en caja.
Instrumental.
·Placas
de agar nutrientes
·Asa
·Cultivo
de bacterias
·Solución
desinfectante
·Mechero
bunsen
·Equipo
de seguridad
Métodos y técnicas.
I. Estriado básico. Se calienta el asa de
inoculación hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier
microorganismo. Dejar que se enfrié por 20 o 30 segundos. Recoge una muestra
del cultivo bacteriano. Levanta la tapa de la placa petri que vas a sembrar en
un ángulo de 45 grados, toca con el asa en el medio y pásalo a través de la
superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrás hacia
adelante.
II. Estriar para aislar. Estriar para aislar
implica una sola inoculación de una sección de la placa de Petri y a
continuación, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección
inicial de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la población
de microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las
bacterias, los bacteriólogos también utilizan este método para aislar una línea
de bacterias que nacen de un solo progenitor.
III. Estriado en T. Para llevar a cabo con
precisión un estriado en T, dibuja una "T" en la parte posterior de
la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador
permanente, divídela por la mitad. A continuación, dibuja una línea divisoria
en una de las mitades para dividirla hasta formar una "T". Gira la
placa de manera que la sección más grande quede a tu derecha. Inocula el asa de
acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio con
el barrido en forma de S, pero no cruces la línea media. Vuelve a calentar el
asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que
la primera de las secciones más pequeñas quede en la esquina inferior derecha.
Comienza barriendo en forma de S en la esquina derecha de la primera sección
que estriaste, en la nueva sección. Pon el asa al calor de la llama hasta que quede
de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Gira la placa una
vez más y repite el barrido en S de la segunda sección a través de la tercera.
IV. Estriado por cuadrantes. Este es también un
método de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar
de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro partes iguales
con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos básicos de estriado para
inocular el primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj,
llevando los microorganismos de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el
método del estratificado en T y calentando el asa antes de inocular el
siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el primero
hasta el cuadrante adyacente.
Estriado en tubo.
Los medios en tubo pueden presentarse sólidos
en forma inclinada, caldo o bien como medios semisólidos. De acuerdo al
procedimiento de inoculación puede emplearse el asa o la aguja para
inoculación. Generalmente se emplea el asa para inocular especímenes en placa y
la aguja de inoculación para la transferencia de cultivos puros de placas a
tubos con medio sólido.
Existen muchas fórmulas de caldos, dependiendo
de la bacteria que se desee crecer. En los tubos con medio sólido, el tubo se
pone a enfriar en posición inclinada, de manera que al solidificar queda la
superficie inclinada. Los tubos inclinados son útiles para el cultivo de
aerobios y anaerobios facultativos. Las características del cultivo tales como
pigmento son fáciles de observar en este tipo de cultivo. Los procedimientos
para inocular caldos, tubos inclinados y por picadura serán demostrados antes
de que se lleven a cabo.
Instrumental.
·Asa y
aguja bacteriológica
·Tubos
con medios de cultivo
·Placas
con medio de cultivo
·Mechero
bunsen
Métodos y técnicas.
INOCULACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO.
1. Flamee el asa o aguja por unos segundos en
forma vertical.
2. Quite el tapón del tubo y manténgalo en la
misma mano en que tiene el asa o aguja para inoculación. Flamee la boca del
tubo y tome una pequeña porción de inoculó.
3. Flamee nuevamente la boca del tubo que tiene
el espécimen que va a trasferir y tápelo.
4. Quite el tapón del tubo que va a inocular y
proceda de acuerdo de acuerdo al medio de cultivo:
Caldo: Basta con tocar el medio con el asa o
aguja, si es poco caldo inclínelo de manera que no introduzca en el tubo el
mango del asa o aguja.
Medio semisólido: por lo general para este
medio se usa la aguja de inoculación la cual se introduce dentro del medio
hasta aproximadamente ¾ partes de profundidad. En un solo movimiento.
Medio sólido inclinado: se lleva el asa o la
aguja hasta donde empieza el declive y se sube haciendo un movimiento de zigzag
sobre la superficie dibujando así una serie de estrías.
Método
de siembra para aislamiento por agotamiento o en estría
Materiales
·Placa
petri con medio de cultivo
·Muestra
(sólida o líquida)
·Asa de
siembra de platino
Con el asa estéril tomamos la muestra y hacemos
extensiones en la placa. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos
parte de la extensión anterior en otra dirección. Volvemos a esterilizar el asa
de siembra y volvemos a extender parte de la segunda extensión en otra
dirección. Esterilizamos y repetimos la operación. Incubamos a 37 º durante 24
horas y, en la primera zona, habrá un amasijo de células. En la segunda, parte
de la primera zona estará mejor extendida, y en la tercera y en la 4ª mejor
aún. Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un
cultivo puro.
·Estría
única:
depositamos la muestra lo más alejado de
nosotros y realizamos la siembra en forma de zig-zag. De esta forma vamos
descargando la muestra del asa. Es importante no volver a repasar el trozo de
medio de cultivo que ya hemos sembrado. Para conseguir que al final de la
estría tengamos colonias aisladas es importante que al principio hagamos la
estría más junta y que la cantidad de muestra tomada en el asa sea la adecuada.
·Estría
múltiple:
en esta técnica de aislamiento por agotamiento
se realizan varias estrías. Esto se puede llevar a cabo flameando el asa de
paso en paso, es decir, de estría en estría, o sin flamear el asa. Además,
dependiendo de la forma en la que hagamos las estrías, existen varios tipos de
estriados:
·Estriado
sobre cuatro cuadrantes:
Se utiliza cuando queremos conservar algún
microorganismo que nos interesa. Consiste en sembrar uno a uno los cuadrantes,
sin flamear el asa entre estría y estría, de tal forma que en el cuarto
cuadrante, al ir agotando la muestra del asa, tendremos los microorganismos
aislados.
